Desarrollar una tecnología para la obtención de nuevos nutracéuticos a partir de extractos de la planta nativa Azorella compacta.
Desarrollar una metodología en bioreactores para la propagación masiva de Azorella compact; Extraer e identificar las fracciones químicas del extracto de Azorell; Evaluar la actividad biológica in vitro e in vivo de los componentes del extracto y del nutracéutico.; Escalar a nivel piloto la producción de extracto de Azorella y realizar su evaluación técnica y económic ; Realizar la protección intelectual, empaquetar la tecnología y transferirl
- Se evaluó simultáneamente la influencia de dos frecuencias de inmersión (12 y 24 h) en el medio nutritivo, sobre la sensibilidad del tejido de la planta. Se utilizó una base nutritiva (Murashigue and skoog) y pH de acuerdo al protocolo de multiplicación proporcionado Uxmal S.A. Cada tratamiento contemplo 5 repeticiones simultáneas con tiempos de inmersión de 3 minutos y tiempo de aireación de 5 minutos. Se evaluó el efecto de la frecuencia de inmersión sobre la variable porcentaje de sobrevivencia de los explantes. - Se recibió 350 plantas de Azorella in vitro de parte de la empresa Uxmal S.A. para los ensayos de agentes osmóticos. - Se evaluó la influencia de agentes osmóticos (Manitol, Glucosa, Polietilenglicol y NaCl) sobre la regulación del potencial hídrico del medio de cultivo. Cada tratamiento contemplo 2 gramos peso fresco inicial y 3 repeticiones. Se utilizo una frecuencia de inmersión de 24 horas, con tiempos de inmersión de 3 minutos y tiempo de aireación de 5 minutos. Se evaluó el efecto en la calidad de la respuesta morfogénica y producción de biomasa de la planta. El grado de cumplimiento de los objetivos es satisfactorio, debido a que las actividades programadas para el segundo periodo del proyecto se han desarrollado de acuerdo a lo previsto. Se definieron las condiciones necesarias para la propagación masiva de las plantas de A. compacta en biorreactores, obtención de extractos metabólicos y separación de los compuestos en cromatografía liquida. Estos resultados permitieron confeccionar el protocolo de micropropagación de plantas de A. compacta en biorreactores. Además, permitieron preparar la cantidad de extracto necesario para la separación de los metabolitos en HPLC. Hasta la fecha no se han presentado desviaciones, en lo que respecta a las actividades técnicas contempladas en el proyecto. Recolectando los resultados obtenidos hasat la fecha, hemos llegado a las siguientes concluciones: - Las condiciones establecidas para la propagación masiva de las plantas de Azorella compacta in vitro utilizando biorreactores, son las siguientes: Utilizar medio nutritivo liquido compuesto por base nutritiva murashigue and skoog, suplemtado con 1.0 mg l-1 BAP , 30 g l-1 sacarosa, 5 g l-1 glucosa, pH 5.7 y 3 ml l-1 ppm. Frecuencia de inmerción cada 24 por 3 minutos y 5 minutos de aireación. - Las condiciones definidas para la extracción de los compuestos metabólicos a partir de la biomasa de Azorella compacta, son las siguientes: Utilizar un extracto soxhlet y mezcla de solvente metanol: cloroformo: agua (proporción 6:2:2) y 60 ºC por 5 horas. - Las condiciones definidas para la separación de los metabolitos en equipo HPLC son: Utilizar una fase móvil de 0.1% acido acético (A): metanol (B) con una gradiente de solvente B: 33-50%(17min), 50% (2min), 50-33 % (5 min), una longuitud de onda de 246 nm y un flujo de 1ml min-1. Atendiendo lo resultados anteriores, podemos decir que el proyecto se encuentra en una ejecución y hasta la fecha ha sido posible cumplir con las actividades programadas sin inconvenientes y desviaciones. Se logró un avance significativo en determinar la frecuencia de inmersión del tejido de Azorella en el medio liquido del Bioreactor. Los resultados obtenido a la fecha indican niveles de sobrevivencia de los explantes sobre el 50 %. Estos resultados solo registran sobrevivencia y no aplica para el incremento de biomasa fresca que se evaluará partir de las actividades de análisis de agentes osmóticos y reguladores de crecimiento que contemplan este objetivo. Se logró un avance preliminar en determinar el solvente de extracción que tiene mas afinidad de polaridad con los metabolitos de interes. Estos resultado permiten definir preliminarmente la naturaleza de los solvente de extracción que se utilizará en los ensayos posteriores que implica una extracción a mayor escala de laboratorio y definir los rendimientos de extracción. Esta actividad, aun no ha logrado extraer eficientemente los compuestos presente en el extracto. Se obtuvo un avance preliminar para determinar los parametros cromatograficos en HPLC. Se implemento una gradiente basica de separación para compuestos de tipo terpenos. Estos resultados permiten la selección de la columna que se comprará y una herramienta basica para definir la gradiente óptima de separación de los compuestos presente en el extracto de Azorella. Esta actividad, aun no ha logrado separar e identificar el número real de fracciones presente en el extracto. El grado de cumplimiento de los objetivos es altamente satisfactorio, puesto que las actividades del periodo se han desarrollado de acuerdo a lo previsto. Se dio inicio al proyecto y hasta la fecha se ha logrado en los mejores resultados un 78% de sobrevivencia de los explantes en los ensayos de frecuencia de inmersión. Los solventes metanol, cloroformo y agua en proporción 6:2:2 preliminarmente tienen mas afinidad con los compuestos de Azorella. Por ultimo, una elusión de solvente en HPLC de modalidad gradiente, preliminarmente son necesarias para definir las condiciones cromatográficas para la separación de los compuestos presentes en el extracto.