Desarrollar productos comerciales que atraigan a adultos (machos y hembras) de la cuncunilla de las hortalizas: Copitarsia turbata, de manera de impedir el apareamiento y evitar la ovipostura sobre espárragos y alcachofas para así lograr una producción de mejor calidad libre de huevos y larvas, y además sin residuos neurotóxicos, aceptables en los mercados nacionales e internacionales.
Identificar ysintetizar las feromonasde Copitarsia spp. y semioquímicos en las plantas deespárragosSeleccionare identificar los principios químicos que atraen a la polilla mediante el uso de antenógrafos Desarrollar unidades de liberación de los productos comerciales atrayentes seleccionados Aplicar en el campo y evaluar su efectividad Difundir los resultados y preparar la formulación comercial
Al i31 de marzo de 2007 el laboratorio de entomología del CRI-Quilamapu disponía de una población C. decolora establecida. Del mismo modo la crianza, mantención y masificación de C. decolora se ha realizado ininterrumpidamente, asegurando así un abastecimiento permanente de individuos para el desarrollo de los objetivos del proyecto. Asimismo se contaba con extractos glandulares obtenidos de hembras vírgenes de C. decolora y extractos de plantas de espárrago. Conjuntamente con lo anterior el grupo de investigación en control biológico incorporó un especialista en el área de ecología química, para fortalecer la investigación en esta área. Por otra parte, Rojas y col. (2006) consiguieron identificar la feromona sexual de C. decolora, indicando que esta compuesta por (z)-9-tetradecenil acetato y (z)-9-tetradecenol. Informe final 2.1 Objetivo general En relación con los antecedentes antes descritos, el presente proyecto propuso identificar la feromona de atracción sexual de C. turbata y los compuestos volátiles presentes en espárragos (posibles kairomonas) responsables de su atractivo para estos insectos y utilizar estos resultados en el desarrollo de sistemas de monitoreo y control de la plaga. 2.2 Objetivos específicos 1. Identificar y sintetizar feromonas de C. turbata y compuestos semioquímicos en plantas de espárragos. 2. Seleccionar e identificar los principios químicos que atraen a la polilla mediante el uso de antenógrafos. 3. Desarrollar unidades de liberación de los productos comerciales atrayentes seleccionados. 4. Aplicar en el campo y evaluar su efectividad. 5. Difundir los resultados y preparar la formulación comercial. 6. Realizar estudios de campo de efectividad de las sustancias identificadas mediante capturas en trampas En relación con el objetivo especifico Nº 1, se logró establecer un protocolo de crianza y masificación de C. turbata, lo que permitió un suministro permanente de insectos para el desarrollo del proyecto. Se obtuvieron extractos de glándulas de hembras vírgenes de C. turbata, en los que se detectó dos compuestos identificados como ácido hexa y octadecanoico. La literatura indica que las feromonas sexuales de muchas especies de polillas son estructuras relativamente simples consistentes de una cadena hidrocarbonada con un grupo funcional y uno o varios dobles enlaces. Así se ha informado que estos compuestos participan como precursores de feromonas en otras especies de Lepidópteros. En el transcurso del proyecto un grupo de investigación Mexicano, liderado por el Dr. Julio Rojas, identificó la feromona sexual de C. turbata (=C. decolora) como (z)-9-tetradecenil acetato y (z)-9-tetradecenol, esto es el resultado de más de 8 años de investigación realizada por este grupo. Por consiguiente, con los componentes de la feromona identificados se sintetizaron en el laboratorio de química de la Universidad de Concepción, posteriormente se realizó un ensayo de campo. Por otra parte, se obtuvieron extractos y volátiles de espárragos. En relación con los compuestos de espárragos, se investigó el rol de los extractos en la conducta de machos de C. turbata,y adicionalmente se incluyeron algunos compuestos estándares comerciales indicados en la literatura como pertenecientes a espárrago. En bioensayos de laboratorio se encontró un extracto (extracción con dimetilformamida) con alguna actividad atrayente para hembras de C. turbata. Posteriormente y según lo planteado en el objetivo específico Nº 2, se estudio la actividad biológica de estos extractos hacia individuos machos de C. turbata, mediante cromatografía de gases acoplada a electroantenografía (GC-EAG). Los resultados de esta actividad no fueron concluyentes. En los objetivos específicos Nº 3, 4 y 6 se planteó el desarrollo de unidades de liberación de los productos comerciales atrayentes y su posterior evaluación en campo. Respecto a estos objetivos, se sintetizaron los componentes de la feromona y se ensayaron diferentes proporciones de estos (4:1, 10:1 y 100:1, alcohol:acetato) para evaluar su efectividad en campo. La mezcla 10:1 resultó ser la mejor para atraer a machos de C. turbata en campo, por lo que puede ser utilizada como una herramienta en el monitoreo y de esta plaga. Respecto al objetivo especifico Nº 5, se presentaron algunos resultados parciales en una charla en el XXVIII Congreso Nacional de Entomología, realizado en Noviembre de 2006 en la Ciudad de Temuco. Además se realizaron exposiciones en la Feria agrícola Expo-INIA versiones año 2006 y 2007 y charlas técnicas de las giras de estudios de alumnos de agronomía de las universidades Santo Tomas, Pontificia Universidad Católica, de Chile y de Concepción. Adicionalmente se desarrollaron prácticas de 4 alumnos del Liceo Agrícola de Cato, 5 prácticas de alumnos de ultimo año de la carrera de Agronomía de las Universidades de Concepción, Santo Tomas y de Chile y se desarrolló una tesis de grado de agronomía, Universidad de Concepción. Sin embargo, respecto a la preparación de la formulación comercial que se planteó en este objetivo, se logró sintetizar los componentes de la feromona y estudiar su efectividad en campo con septos de goma impregnados. A partir de este estudio se identificó una mezcla atrayente (z-9-tetradecenol : z-9-tetradecenil acetato, 10:1) quedando aún por evaluar otros soportes o sistemas de liberación controlada distintos a los septos y otras trampas, que optimicen el uso de la feromona y por ende los recursos para así lograr una alternativa de mercado competitiva a los sistemas de control existentes para esta plaga. 5. RESULTADOS 5.1 Crianza de C. turbata Aún cuando el desarrollo del protocolo de crianza fue exitoso la mortalidad de esta especie en condiciones de laboratorio alcanza entre 70% y 75% (Rojas y col., 2006). Sin embargo, esta actividad permitió un abastecimiento constante de individuos para la realización del proyecto y permitirá desarrollar futuras investigaciones con esta especie o con otras mediante su adaptación. 5.2 Extractos glandulares El análisis GC-MS de los extractos glandulares permitió detectar dos compuestos desde los extractos de hembras vírgenes los que se identificaron como ácido hexa y octadecanoico (Figuras 2 y 3). En relación con este resultado la literatura indica que las feromonas sexuales de muchas especies de polillas son estructuras relativamente simples consistentes de una cadena hidrocarbonada con un grupo funcional y uno o varios dobles enlaces. Así se ha informado que estos compuestos participan como precursores de feromonas en otras especies de Lepidópteros. Posteriormente se estudio la actividad biológica de estos extractos hacia individuos machos de C. turbata, esta actividad fue evaluada mediante GC-EAG. Los resultados de esta actividad no fueron concluyentes. Figura 2. Espectro de masa de ácido hexanoico. Figura 3. Espectro de masa de ácido octadecanoico. 5.3 extractos de espárragos En relación con los compuestos semioquímicos de espárragos, los resultados indican que las técnicas extracción empleadas con solvente y SPME no produjeron resultados importantes, y fue necesario complementarlos con otras técnicas como Headspace con plantas vivas en laboratorio y campo. Posteriormente se investigó el rol de los extractos en la conducta de machos de C. turbata de algunos compuestos estándares comerciales indicados en la literatura como pertenecientes a espárrago. La actividad biológica de estos compuestos fue evaluada mediante electroantenografia, bioensayos olfativos con machos y hembras y determinación de las curvas de dosis-respuesta. Estas muestras fueron identificadas mediante análisis GC-MS (Thermofinnigan, Modelo DSQ, Figuras 4-6). Figura 4. Cromatograma extracción con dmf Figura 5. Cromatograma extracción con heptano Figura 6. Cromatograma extracción con etanol 5.4 Bioensayos Por medio de bibliografía, inyección de estándares y búsqueda en base de datos de librería de espectros d