Desarrollar una tecnología nacional de propagación in vitro de variedades seleccionadas de olivo, que permita a cualquier laboratorio calificado aplicar la técnica con resultados seguros.Desarrolloar una técnica de enraizamiento in vitro e in vivo y aclimatación de las plántulas obtenidas en ambas técnicas.Disenar y evaluar la infraestructura necesaria para la ejecución de esta técnica y evaluar los ambientes de crecimiento aptos para la aclimatación, tanto aéreos como basales.
Obtención de un protocolo de establecimiento y proliferación de las variedades selecionadas de olivos Obtención de un protocolo de enraizamiento in vitro Obtención de un protocolo de enraizamiento in vitro. Tipificación y elección de los sustratos que cumplan con las condiciones ideales para la fase de aclimatación y enraizamiento de plántulas inducidas in vitro. Determinación de las variables bioclimáticas para la aclimatización y enraizamiento de las plántulas obtenidas de la propagación in vitro. Diseno y evaluación de la infraestructura que asegure la reproductividad de la tecnología (instrumentos, maquinarias, herramientas)
El proyecto determinó que el explante uninodal es el mas adecuado para la micropropagación del olivo y que la mejor época de extracción de este material es en primavera, hasta fines del verano, es decir, la época en que se produce el creclmiento vegetativo la etapa de desinfección es crítica para la propagación in vitro de los explantes, y se debe realizar con posterioridad a un pre-acondicionamiento del material, ya que esto mejora la acción del tratamiento con hipoclorito de sodio. Se desarrollaron exitosamente las etapas de evaluación de un protocolo de desinfección de los explantes y determinación del medio de establffimiento más adecuado, Posteriormente, en la etapa de proliferación, la longitud promedio obtenida de los brotes fue de sólo 1,2 cm, en el mejor de los casos. En consecuencia, se decidió someter el material, con posterioridad, a un ensayo de elongación, ya que con esa longitud no era posible llevar el material aenraizamiento in vitro, ni in vivo. Sin embargo, en esa etapa complementaria posterior, el porcentaje de enraizamiento in vitro alcanzado fue insuficiente, y no se consiguió el enraizamiento in vivo posterior de las estacas provenientes del enraizamiento in vitro. Tampoco se logró aclimatar las microestacas enraizadas in vitro. En las etapas previas al enraizamiento, los procedimientos realizados y los resultados obtenidos fueron los siguientes: Para evaluar un protocolo de desinfección de los explantes de olivo se realizaron 7 ensayos, utilizando el medio OM (Olive Medium, descrito por Rugini, con algunas modificaciones) con distintas concentraciones de hipoclorito de sodio, y se determinó que se alcanzaron mejores resultados con las concentraciones más altas, de 2,5%. En todo caso, los porcentajes de éxito no fueron altos, lo que pudo deberse a que en ciertas épocas del año el material es más propenso a la contaminación. La determinación del medio de establlecimiento más adecuado para los explantes de olivo, se basó en el medio de establecimiento descrito por Rugini, pero modificando las dosis de zealina. El crffimiento a los 34 días mostró una diferencia significativa entre el tratamiento sin zeatina (0,51 cms de crecimiento) frente a dos tratamientos con distintas concentraciones de zeatina, aunque en este último caso no fue significativa la diferencia entre las concentraciones (el tratamiento con 0,5 mg/l de zeatina produjo un crecimiento de 1,23 cm y el tratamiento con 1,0 mg/l un crecimiento de 1,45 cm). Para determinar el mejor medio de proliferación para cultivo in vitro de explantes uninodales de olivo, se utilizó el medio basal descrito por Rugini, pero evaluando tres concentraciones de zeatina, de O, 2 Y4 mg/l. El estudio recomendó el uso de 2 mg/l de zeatina, ya que así se obtuvo un mayor número de brotes (un promedio de 2,3 brotes, frente a 15 con el tratamiento sin zeatina y 1,6, con el tratamiento de 4 mg/l de zeatina), además de que éstos presentaron un menor porcentaje de vitrificación, El proyecto implementó, según lo previsto, una cámara de aclimatación y enraizamiento sobre la base de los siguientes principios: aislación del ambiente exterior, control de la temperatura del sustrato, control de la humedad foliar y control de la renovación atmosférica. Para cada uno de estos parámetros, la cámara fue provista de un controlador electrónico que permitiera mantener los niveles deseados. Las variables bioclimáticas para la aclimatación y el enraizamiento de plántulas obtenidas de propagación in vitro, determinadas en el proyecto, fueron temperatura basal, temperaturas extremas del aire, humedad relativa, régimen de renovación de gases, humedad foliar y luminosidad. Considerando que no fue posible llegar a la fase de enraizamiento, se desarrolló una etapa complementaria, tendiente a ese objelivo, utilizando explantes de olivo (microestacas de 2,0 cm de longitud) de la variedad sevillano que crecían en condiciones in vitro, procedentes de las etapas anteriores, las cuales tueron sometidas a dos clases de tratamientos, con los siguientes resultados: a) En los tratamientos con ácido naftalén acético (ANA) se obtuvo un 40% de enraizamiento in vitro de microestacas de olivo. Estas microestacas, una vez que las raices alcanzaron los 2,0 cm de longitud, se llevaron a la cámara bioclimálica para su aclimatación a las condiciones in vivo, Sin embargo, comenzaron a mostrar sintomas de deshidratación y posteriormente las plantas se desfoliaron y sus tallos se secaron, de modo que a los 20 dias se registraba ya la muerte de todo el material vegetal. Por otra parte, el porcentaje de enraizamiento in vitro logrado no es suficiente para aplicar esta técnica a escala comercial. b) En los tratamientos con ácido indol butirico no se logró enraizamiento in vitro de las estacas de olivo.